1、 為什么溶劑和樣品要過(guò)濾?
溶劑和樣品過(guò)濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。
色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。
儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。
樣品過(guò)濾頭的類(lèi)型：
30mm內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過(guò)濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50μl。
13mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過(guò)濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料為纖維素。
3mm內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過(guò)濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格。處理樣品體積為7μl。
濾膜類(lèi)型：
1.聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無(wú)任何可溶物。
2.醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)樣品。
3.尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸，70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。
4.再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機(jī)溶劑。
2、 為什么HPLC用緩沖鹽時(shí)要加在線(xiàn)Seal-wash選項(xiàng)？
HPLC用緩沖鹽時(shí),由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒非常堅(jiān)硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿上,隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動(dòng),容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線(xiàn)Seal-wash選項(xiàng)能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時(shí),必須使用該在線(xiàn)沖洗選項(xiàng).
清洗液配制: 90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類(lèi)生長(zhǎng)和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。
3、 為什么Agilent 1100LC的流動(dòng)相管路非常細(xì)?
在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小4~5個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，Agilent 1100LC 使用加工工藝難度高的毛細(xì)管線(xiàn)作為流動(dòng)相管路。
毛細(xì)管線(xiàn)分類(lèi)：0.17mm內(nèi)徑 ------綠色 ;0.12mm內(nèi)徑-------紅色。
PEEK 管線(xiàn)：內(nèi)徑 -----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。
毛細(xì)管線(xiàn)優(yōu)點(diǎn): 柔韌性好.
***Agilent 公司同時(shí)備有1/16in 的粗外徑毛細(xì)管線(xiàn),適用于不同習(xí)慣的用戶(hù) ,優(yōu)點(diǎn)是剛性好,但柔韌性差一些。